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熒光原位雜交儀酵母雙雜交系統

2021-12-27 15:49:40

熒光原位雜交儀酵母雙雜交系統(Y2H)原理:


傳統Y2H檢測的原理是利用報告基因,其激活依賴于特定的轉錄因子。具體而言,待測蛋白質X和Y分別與 DNA 結合域 (BD) 和轉錄因子的激活域 (AD) 融合。BD-X 融合蛋白與報告基因啟動子的上游激活子序列 (UAS) 結合。在X和Y之間相互作用時,AD將被募集到啟動子,并重建功能性轉錄因子,從而觸發報告基因的后續轉錄]

作為一種基因技術,酵母雙雜交篩選提供了一種敏感且經濟的方法來測試兩個目標蛋白之間的直接相互作用,或使用蛋白質作為誘餌來篩選從所需的細胞類型、組織或整個生物體制備的蛋白質片段庫。通過測序所選酵母菌菌落中相應的質粒,確定相互作用。   


實驗步驟:


①創建BD-X誘餌;②通過BD-X誘餌測試自我激活;③執行酵母雙雜交篩選和識別獵物


 Y2H檢測服務:


 

熒光原位雜交儀設備



為了研究大量蛋白質的相互作用,科學家根據Y2H系統,開發了幾種系統以適應不同蛋白質的不同亞細胞定位和生化特征。KMD  Bioscience為客戶提供多種系統的服務,以適應不同項目的不同需求。


● 酵母單雜交系統:研究蛋白質-DNA下相互作用

 


圖2 Y1H原理示意圖


● 酵母三雜交系統:研究第三成分介導的蛋白質的相互作用



圖3 Y3H原理示意圖


● 分裂泛素Y2H系統:用于研究膜蛋白



客戶提供:


--不少于2? 的質粒(含誘餌靶基因)


--該基因的DNA序列,以便我們設計合成方案,進行人工合成(需收費)


交付內容:


--陽性克隆若干及DNA測序結果


--每個陽性克隆不少于2? 質粒


實驗周期:約6-8周


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